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ELISA样本制备指南及注意事项
来源:http://www.yixingshe.net  时间:23-01-25 05:40
摘要: 对于悬浮细胞:离心收集细胞,以2×106细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。以2百万细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓

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多囊卵巢综合征(PCOS)是生育年龄妇女常见的一种复杂的内分泌及代谢异常所致的疾病,以慢性无排卵(排卵功能紊乱或丧失)和高雄激素血症(妇女体内男性激素产生过剩)为特征。

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结婚后发现多囊遭遇生育难题

一直以来,月经不规律,从没有往生育方面去想,没想到结婚后一次检查,发现了不孕症,刚开始,老公以及家人没有说什么,可是每次吵架后都会影射一些问题,导致婚姻出现危机,本应觉得理亏的自己走上了试管的道路,挽救这摇摇欲坠的家庭。

多囊对生育功能的影响是卵泡期多个卵泡同时发育但不能形成优势卵泡,故无排卵发生,属于卵巢性不孕不育。

多次治疗无果,最后进行试管

对于多囊卵巢来说,临床通过调节月经周期、降低血雄激素水平、改善胰岛素抵抗、诱发排卵来治疗,但往往都是治标不治本,极易复发。而选择试管婴儿的优势是单周期可以取得多个卵子,甚至比其他女性更多,提高受孕成功率。

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ELISA样本制备指南及注意事项

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定义及介绍

ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附测定)是最基础的免疫学实验之一,其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本,实验操作步骤并不繁琐,但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值,从而供下一步分析所用,因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。


ELISA样本制备指南及注意事项

稀释100倍:一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内,做100倍稀释;

稀释1000倍:两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内,做20倍稀释,再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释1000倍;

稀释100000倍:三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内,做40倍稀释,再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释100000倍;

每步稀释时取液量不少于3μL,稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀,避免起泡。


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若所检样本不在说明书所列样本之中,建议做预实验验证其检测有效性。

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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液,由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本,经BCA法测定样本蛋白含量后,建议进行蛋白浓度的统一化,避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差;例如,统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL,进行后续的稀释和检测。


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